期刊简介
本刊是由重庆医科大学主办的综合性医学专业性学术刊物，已被《中文科技期刊数据库》、《中国期刊全文数据库》、《中国学术期刊综合评价数据库》、《中国科技论文统计源期刊》、《中国生物文摘》、《中国生物学文献数据库》全文收录。通过论著、临床研究及短篇报道等栏目刊登基础医学、临床医学等相关内容。为了更好地反映国内外最新科研成果及医药信息，欢迎从事医学卫生事业的人员踊跃投稿，并优先考虑属国家、省、市科研基金项目的论文。
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首页>重庆医科大学学报杂志
- 杂志名称：重庆医科大学学报杂志
- 主管单位：重庆市教育委员会
- 主办单位：重庆医科大学
- 国际刊号：0253-3626
- 国内刊号：50-1046/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：被《中文科技期刊数据库》收录期刊收录：上海图书馆馆藏, 农业与生物科学研究中心文摘, 国家图书馆馆藏, 剑桥科学文摘, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 哥白尼索引(波兰), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 维普收录(中)
PCK1影响肝癌细胞迁移能力的研究
向进；庹琳；高庆祝；杨翼；梁利；夏杰；唐霓；汪凯
关键词：PCK1, 重组腺病毒, CRISPR/Cas9, 肝癌, 迁移
摘要：目的:构建编码磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶 (phosphoenolpyruvate carboxykinase, PEPCK) 的基因PCK1重组腺病毒和基因敲除2种细胞模型, 并初步观察PCK1过表达和敲除后对肝癌细胞迁移能力的影响.方法:PCK1 c DNA克隆到p AdTrackTO4载体, 构建重组腺病毒质粒, 在HEK293细胞中包装、扩增成高滴度重组腺病毒AdPCK1;利用CRISPR/Cas9系统在PLC/PRF/5肝癌细胞系中筛选出PCK1基因敲除的稳定细胞株.首先, 在过表达模型将Huh7细胞设为2组:AdGFP组和AdPCK1组, AdGFP组为感染腺病毒AdGFP的对照组, AdPCK1组为感染腺病毒AdPCK1的实验组.在敲除模型设Parental组和KO组, Parental组是PLC/PRF/5细胞作为对照组, KO组是PCK1基因敲除稳定细胞株作为实验组.Western blot技术检测2种模型蛋白表达量, 采用划痕实验观察细胞迁移能力, 进一步经q RT-PCR检测影响肝癌细胞的迁移关键分子.结果:重组腺病毒AdPCK1构建成功, 经Western blot鉴定PCK1在Huh7细胞中的表达.向导RNA (single guide RNA, sg RNA) 寡核苷酸双链成功插入酶切后的Lenti CRISPR-V2质粒载体中且测序正确;经Western blot鉴定PCK1敲除的细胞株筛选成功.划痕结果显示, PCK1过表达模型在48 h的细胞迁移率为 (66.300±0.383) ％, 与AdGFP组[ (42.900±3.833) ％]相比明显增加 (t=10.540, P=0.000) ;PCK1敲除KO组在48 h的细胞迁移率为 (59.40±5.68) ％, 与亲本细胞组[ (79.00±5.20) ％]相比明显减少 (t=4.420, P=0.012) .q RT-PCR结果显示, PCK1过表达后, 相较于对照组AdGFP, Cdh1相对表达量为2.733±0.501 (t=5.989, P=0.004) , 相对表达增高;PCK1敲除后, 相较于亲本细胞组, Cdh1相对表达量为0.664±0.017 (t=34.290, P=0.000) , 相对表达减少.结论:PCK1过表达后可明显抑制肝癌细胞的迁移能力, 而敲除后促进其迁移, 证实PCK1可能作为抑癌基因参与肝癌的发生和发展.
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