期刊简介
本刊是由重庆医科大学主办的综合性医学专业性学术刊物，已被《中文科技期刊数据库》、《中国期刊全文数据库》、《中国学术期刊综合评价数据库》、《中国科技论文统计源期刊》、《中国生物文摘》、《中国生物学文献数据库》全文收录。通过论著、临床研究及短篇报道等栏目刊登基础医学、临床医学等相关内容。为了更好地反映国内外最新科研成果及医药信息，欢迎从事医学卫生事业的人员踊跃投稿，并优先考虑属国家、省、市科研基金项目的论文。
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首页>重庆医科大学学报杂志
- 杂志名称：重庆医科大学学报杂志
- 主管单位：重庆市教育委员会
- 主办单位：重庆医科大学
- 国际刊号：0253-3626
- 国内刊号：50-1046/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：被《中文科技期刊数据库》收录期刊收录：上海图书馆馆藏, 农业与生物科学研究中心文摘, 国家图书馆馆藏, 剑桥科学文摘, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 哥白尼索引(波兰), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 维普收录(中)
重组小鼠白细胞介素-27融合蛋白多克隆抗体的制备及鉴定
路晓红；付玉荣；伊正君
关键词：小鼠白细胞介素-27, 重叠延伸PCR, 融合蛋白, 原核表达, 多克隆抗体
摘要：目的:制备重组小鼠白细胞介素-27 (interleukin-27,IL-27)融合蛋白的多克隆抗体并鉴定其活性.方法:用反转录PCR从小鼠脾细胞扩增出EB病毒诱导基因3(EBI3)和p28成熟肽基因片段,采用重叠延伸PCR用(Gly4Ser)3接头将2个片段进行连接,将得到的小鼠IL-27单链融合基因片段克隆于pET-32a(+)载体.阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,利用SDS-PAGE与Western blot鉴定目的蛋白的表达.以纯化的IL-27融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗小鼠IL-27融合蛋白的多克隆抗体,利用Western blot和ELISA进行特异性及效价分析.结果:从小鼠脾细胞总RNA中扩增得到IL-27单链融合基因经测序与预期序列一致;在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导,SDS-PAGE显示表达出的融合蛋白相对分子质量(molecular weight,Mr)约67 000;Western blot结果表明该融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体发生反应;该蛋白免疫新西兰大白兔后获得抗血清,Western blot结果显示该血清可以特异性地与IL-27融合蛋白结合,ELISA测定该多克隆抗体的效价可以达到1:3 200.结论:在大肠杆菌中成功表达出小鼠IL-27融合蛋白,并制备出效价较高、特异性较好的兔抗小鼠IL-27多克隆抗体.
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