期刊简介
本刊是由重庆医科大学主办的综合性医学专业性学术刊物，已被《中文科技期刊数据库》、《中国期刊全文数据库》、《中国学术期刊综合评价数据库》、《中国科技论文统计源期刊》、《中国生物文摘》、《中国生物学文献数据库》全文收录。通过论著、临床研究及短篇报道等栏目刊登基础医学、临床医学等相关内容。为了更好地反映国内外最新科研成果及医药信息，欢迎从事医学卫生事业的人员踊跃投稿，并优先考虑属国家、省、市科研基金项目的论文。
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首页>重庆医科大学学报杂志
- 杂志名称：重庆医科大学学报杂志
- 主管单位：重庆市教育委员会
- 主办单位：重庆医科大学
- 国际刊号：0253-3626
- 国内刊号：50-1046/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：被《中文科技期刊数据库》收录期刊收录：上海图书馆馆藏, 农业与生物科学研究中心文摘, 国家图书馆馆藏, 剑桥科学文摘, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 哥白尼索引(波兰), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 维普收录(中)
尿源性干细胞的分离、培养、鉴定及永生化
耿睿之；何云锋；张尧；张元原；吴小候
关键词：干细胞, 泌尿系统, 细胞永生化
摘要：目的:分离、培养、鉴定尿液来源的于细胞并永生化,为后续下尿路组织重建的研究提供种子细胞.方法:收集人新鲜尿液,对得到的单个贴壁细胞进行培养.倒置显微镜观察尿源性干细胞(urine-derived stem cells,USC)形态,免疫荧光以及流式细胞术检测干细胞表面标记物.RT-PCR检测尿路上皮细胞和平滑肌相关基因.诱导USC向尿路上皮细胞和平滑肌细胞分化.将pSEB-hTERT逆转录病毒感染USC得到永生化的尿源性干细胞(immortalized urine-derived stem cells,iUSC).RT-PCR以及Western blot检测iUSC和USC中hTERT基因和蛋白的表达并绘制增殖曲线.对iUSC检测干细胞表面标记物CD73、CD90、CD146、SSEA-4及免疫荧光检测尿溶蛋白Ⅰa和肌间线蛋白.结果:成功分离培养得到USC,其外观呈“米粒状”,干细胞表面标记物CD73、CD90、CD146、SSEA-4均呈阳性;RT-PCR结果显示尿路上皮细胞表面标记物(尿溶蛋白Ⅰa和Ⅲ、细胞角蛋白-7和13)及平滑肌表面标记物(肌间线蛋白和α-平滑肌肌动蛋白)表达阳性.RT-PCR中hTERT基因表达量为41 636.00±4 134.42,同USC(25 452.67±1 586.32)比较具有统计学意义(P=0.032);Western blot中hTERT蛋白表达量为94 479.00±7 102.20,同USC(61 541.67±3 956.54)比较具有统计学意义(P=0.017).iUSC能连续多代培养,增殖曲线呈“S”形,且与USC对比其增殖能力增强(P0d0.272,P1d=0.043,P3d=0.000,P5d=0.006,P7d=0.001,P9d=0.025),细胞增殖与天数(P=0.000,F=219.572)和细胞类型(P=0.000,F=90.855)均相关;CD34、CD73、CD90、CD146、SSEA-4依次为0.3％、91.4％、15.3％、99.4％、95.3％,表达无变化;免疫荧光显示尿溶蛋白Ⅰa和肌间线蛋白呈阳性表达.结论:成功从尿液中分离、培养、鉴定尿源性干细胞并永生化,即iUSC为再生医学和组织工程学提供稳定安全的种子细胞.
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