期刊简介
本刊是由重庆医科大学主办的综合性医学专业性学术刊物，已被《中文科技期刊数据库》、《中国期刊全文数据库》、《中国学术期刊综合评价数据库》、《中国科技论文统计源期刊》、《中国生物文摘》、《中国生物学文献数据库》全文收录。通过论著、临床研究及短篇报道等栏目刊登基础医学、临床医学等相关内容。为了更好地反映国内外最新科研成果及医药信息，欢迎从事医学卫生事业的人员踊跃投稿，并优先考虑属国家、省、市科研基金项目的论文。
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首页>重庆医科大学学报杂志
- 杂志名称：重庆医科大学学报杂志
- 主管单位：重庆市教育委员会
- 主办单位：重庆医科大学
- 国际刊号：0253-3626
- 国内刊号：50-1046/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：被《中文科技期刊数据库》收录期刊收录：上海图书馆馆藏, 农业与生物科学研究中心文摘, 国家图书馆馆藏, 剑桥科学文摘, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 哥白尼索引(波兰), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 维普收录(中)
新型基因组编辑蛋白FnCpf1的表达、鉴定及多克隆抗体的制备
孙菱；卢楠；杨春；康月茜；杨婕；何永林；方陈城；吴宣艳；王瑜伟
关键词：基因编辑, CRISPR-Cas, FnCpf1, 多克隆抗体
摘要：目的:构建土拉弗朗西丝菌Novicida亚种Cpf1蛋白编码基因的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达、纯化重组FnCpf1蛋白后,制备兔抗FnCpf1多克隆抗体.方法:利用PCR技术扩增FnCpf1基因,将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)中并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白的表达,通过镍离子金属螯合磁珠亲和纯化得到纯度较高的FnCpf1蛋白,将纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备FnCpf1多克隆抗体,并用间接ELISA法检测兔抗血清效价、Western blot鉴定其特异性.结果:扩增得到3 900 bp的目的基因片段,克隆到表达载体pET-32a(+)后,通过双酶切及测序证实pET-32a(+)-FnCpf1表达载体构建成功,可诱导表达相对分子质量160 kD的目的蛋白,经SDS-PAGE分析其为可溶性,通过镍离子金属螫合磁珠亲和纯化得到纯度为95％以上的FnCpf1蛋白,制备多克隆抗体并检测兔抗FnCpf1抗血清ELISA效价达1:512000,Western blot结果显示制备的抗体可较好地与FnCpf1蛋白特异性结合.结论:在原核系统中成功表达了FnCpf1重组蛋白,并用纯化后的蛋白制备出兔抗FnCpf1抗体,效价及特异性均良好,为进一步探讨Cpf1蛋白的生物学特性打下实验基础.
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