期刊简介
本刊是由重庆医科大学主办的综合性医学专业性学术刊物，已被《中文科技期刊数据库》、《中国期刊全文数据库》、《中国学术期刊综合评价数据库》、《中国科技论文统计源期刊》、《中国生物文摘》、《中国生物学文献数据库》全文收录。通过论著、临床研究及短篇报道等栏目刊登基础医学、临床医学等相关内容。为了更好地反映国内外最新科研成果及医药信息，欢迎从事医学卫生事业的人员踊跃投稿，并优先考虑属国家、省、市科研基金项目的论文。
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首页>重庆医科大学学报杂志
- 杂志名称：重庆医科大学学报杂志
- 主管单位：重庆市教育委员会
- 主办单位：重庆医科大学
- 国际刊号：0253-3626
- 国内刊号：50-1046/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：被《中文科技期刊数据库》收录期刊收录：上海图书馆馆藏, 农业与生物科学研究中心文摘, 国家图书馆馆藏, 剑桥科学文摘, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 哥白尼索引(波兰), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 维普收录(中)
转化生长因子β型受体Ⅰ基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其在人胚成纤维细胞中的表达
林时辉；付娟；王川江；刘琼
关键词：RNA干扰, 慢病毒载体, 转化生长因子βⅠ型受体, 人胚肺成纤维细胞
摘要：目的:构建转化生长因子β型受体Ⅰ (transforming growth factor beta receptor Ⅰ,TGFβRⅠ)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体并在人胚肺成纤维细胞株MRC-5上鉴定其沉默效应.方法:构建4种针对人TGFβR Ⅰ基因不同干扰靶点的慢病毒干扰载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定,将筛选出的4种有效重组慢病毒干扰载体和其它辅助质粒一起共转染293T细胞并测定病毒滴度.后将4种重组的慢病毒干扰载体分别感染MRC-5细胞,采用Real-time PCR和Western blot检测它们对靶基因的沉默效率.结果:经双酶切鉴定和DNA测序,证实短发夹RNA正确插入慢病毒载体且插入的序列正确.4种重组慢病毒干扰载体经293T细胞成功包装后,其病毒滴度分别为:siRNA-1 6.37×107 TU/ml、siRNA-2 1.65×108 TU/ml、siRNA-3 4.50×108 TU/ml、siRNA-4 2.31×108 TU/ml,阴性对照组载体包装后的病毒滴度为:1.79×109 TU/ml.4种重组慢病毒干扰载体感染MRC-5细胞的效率均为93％左右.与正常对照组和阴性对照组比较,在感染4种重组慢病毒干扰载体(siRNA-1～4)后,MRC-5细胞内TGFβR Ⅰ mRNA表达水平均明显下降(P=0.000),其中TGFβRⅠ-siRNA-2下降明显,沉默效率好.Western blot结果与qRT-PCR结果一致,4种重组慢病毒干扰载体均能使MRC-5细胞内TGFβR Ⅰ蛋白表达明显下降(=0.000),且TGFβR Ⅰ-siRNA-2干扰效率大.结论:筛选并构建了能有效沉默TGFβR Ⅰ基因的佳RNAi重组慢病毒载体——TGFβR-siRNA-2,从而为后续研究奠定基础.
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