期刊简介
本刊是由重庆医科大学主办的综合性医学专业性学术刊物，已被《中文科技期刊数据库》、《中国期刊全文数据库》、《中国学术期刊综合评价数据库》、《中国科技论文统计源期刊》、《中国生物文摘》、《中国生物学文献数据库》全文收录。通过论著、临床研究及短篇报道等栏目刊登基础医学、临床医学等相关内容。为了更好地反映国内外最新科研成果及医药信息，欢迎从事医学卫生事业的人员踊跃投稿，并优先考虑属国家、省、市科研基金项目的论文。
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首页>重庆医科大学学报杂志
- 杂志名称：重庆医科大学学报杂志
- 主管单位：重庆市教育委员会
- 主办单位：重庆医科大学
- 国际刊号：0253-3626
- 国内刊号：50-1046/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：被《中文科技期刊数据库》收录期刊收录：上海图书馆馆藏, 农业与生物科学研究中心文摘, 国家图书馆馆藏, 剑桥科学文摘, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 哥白尼索引(波兰), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 维普收录(中)
腺病毒介导凋亡素诱导人大细胞肺癌NCI-H460细胞凋亡的研究
阮军；任春利；缪李丽
关键词：凋亡素, 大细胞肺癌, 细胞凋亡, 基因治疗
摘要：目的:构建携带VP3基因重组腺病毒载体(pAdxsi-GFP-VP3),探讨凋亡素(Apoptin)在人大细胞肺癌NCI-H460细胞中的表达及诱导凋亡效应.方法:以pcDNA3.1-VP3重组质粒为模板,经酶切将VP3基因连接至穿梭质粒,后转移至pAdxsi载体上,收获pAdxsi-GFP-VP3,经酶切和测序鉴定正确后进行病毒扩增和纯化,后测定病毒滴度.将pAdxsi-GFP-VP3以适感染复数转染入人大细胞肺癌NCI-H460细胞,利用RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot技术检测Apoptin在细胞中的表达情况;透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)下观察细胞的超微结构;MTT法检测细胞的增殖活性;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测转染后细胞的凋亡率及细胞周期.结果:成功构建重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-VP3,经酶切与测序鉴定证实连接正确,病毒滴度可达1.6×109 PFU/ml.RT-PCR显示转染48 h后Apoptin的mRNA表达;Westem blot证实转染72 h后Apoptin蛋白获得高表达.TEM观察发现NCI-H460细胞凋亡早期染色质聚集,线粒体固缩,凋亡中晚期出现凋亡小体等超微形态学改变.MTT法检测显示转染后的NCI-H460细胞增殖活性明显降低,呈时间依赖性(F=93.384,P=0.000),与空病毒组和细胞对照组比较,差异有统计学意义(F=18.427,P=0.003).FCM法检测显示Apoptin能有效地诱导NCI-H460细胞发生凋亡(F=47.307,P=0.000),且凋亡率随时间呈逐渐上升趋势(F=303.237,P=0.000);细胞周期表现为S期细胞比例降低(F=80.240,P=0.000),G2/M期细胞比例增高(F=110.080,P=0.000).结论:Apoptin可以有效地诱导人大细胞肺癌NCI-H460细胞发生凋亡,这为Apoptin临床应用于人非小细胞肺癌基因治疗的深入研究奠定实验基础.
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