期刊简介
本刊是由重庆医科大学主办的综合性医学专业性学术刊物，已被《中文科技期刊数据库》、《中国期刊全文数据库》、《中国学术期刊综合评价数据库》、《中国科技论文统计源期刊》、《中国生物文摘》、《中国生物学文献数据库》全文收录。通过论著、临床研究及短篇报道等栏目刊登基础医学、临床医学等相关内容。为了更好地反映国内外最新科研成果及医药信息，欢迎从事医学卫生事业的人员踊跃投稿，并优先考虑属国家、省、市科研基金项目的论文。
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首页>重庆医科大学学报杂志
- 杂志名称：重庆医科大学学报杂志
- 主管单位：重庆市教育委员会
- 主办单位：重庆医科大学
- 国际刊号：0253-3626
- 国内刊号：50-1046/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：被《中文科技期刊数据库》收录期刊收录：上海图书馆馆藏, 农业与生物科学研究中心文摘, 国家图书馆馆藏, 剑桥科学文摘, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 哥白尼索引(波兰), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 维普收录(中)
人肝再生增强因子真核表达及其对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响
郑钰；李小芳；孙航；刘杞
关键词：肝再生增强因子, 酵母表达, 生物学活性, 镍柱亲和层析
摘要：目的:构建人肝再生增强因子(human augmenter of liver regeneration,hALR) 15kD亚型的真核表达系统,并探索ALR对顺铂(Cisplatin,DDP)诱导的人肝癌细胞株QGY凋亡的影响.方法:用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法和基因重组技术,从重组质粒pPIC9K-rhALR中扩增出编码rhALR基因片段,将其克隆入pPICZαA质粒中构建重组质粒pPICZα-A-rhALR.重组质粒SacⅠ酶切线性化后电转入酵母GS115中,并在1％的甲醇诱导下表达.表达上清蛋白经Western blot(ALR多克隆抗体和His-tag标签抗体)鉴定和镍柱亲和层析纯化.MTS试剂检测rhALR体外对人肝癌细胞(HepG2、QGY)的促增殖活性,及流式细胞仪检测rhALR在顺铂诱导QGY细胞凋亡中的抗凋亡作用.结果:PCR、双酶切、DNA测序均鉴定重组质粒构建与预期一致.分泌表达的rhALR约占上清总蛋白的70％,目的分子量约17 kD,Western blot均可见单一条带.纯化后的rhALR对HepG2和QGY的体外促增殖作用呈浓度依赖性增强(HepG2组:F=246.729,P=0.000;QGY组:F=246.004,P=0.000),且在QGY细胞顺铂诱导凋亡时也发挥着浓度梯度式抗凋亡作用(F=101.061,P=0.000).结论:成功构建高效分泌表达rhALR的pPICZα-A-rhALR GS115真核表达系统;体外实验证实rhALR对顺铂诱导人肝癌细胞有呈浓度依赖性的抗凋亡作用.
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