期刊简介
本刊是由重庆医科大学主办的综合性医学专业性学术刊物，已被《中文科技期刊数据库》、《中国期刊全文数据库》、《中国学术期刊综合评价数据库》、《中国科技论文统计源期刊》、《中国生物文摘》、《中国生物学文献数据库》全文收录。通过论著、临床研究及短篇报道等栏目刊登基础医学、临床医学等相关内容。为了更好地反映国内外最新科研成果及医药信息，欢迎从事医学卫生事业的人员踊跃投稿，并优先考虑属国家、省、市科研基金项目的论文。
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首页>重庆医科大学学报杂志
- 杂志名称：重庆医科大学学报杂志
- 主管单位：重庆市教育委员会
- 主办单位：重庆医科大学
- 国际刊号：0253-3626
- 国内刊号：50-1046/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：被《中文科技期刊数据库》收录期刊收录：上海图书馆馆藏, 农业与生物科学研究中心文摘, 国家图书馆馆藏, 剑桥科学文摘, 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 万方收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 哥白尼索引(波兰), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 维普收录(中)
pri-mir-302/367重组慢病毒载体的构建及其下游调节基因的鉴定
张耀林；马海滨；陈冬梅；范恒；李玉奎
关键词：pri-mir-302/367, TET-ON系统, 可诱导性慢病毒载体, Hela细胞
摘要：目的:构建可诱导表达pri-mir-302/367的慢病毒载体,并研究miR-302/367家族基因miR-302a/b/c/d和miR-367及其下游调节基因OCT4、SOX2和NANOG在HeLa细胞中的诱导性表达.方法:以正常人基因组DNA为模板,PCR扩增pri-mir-302/367基因.经双酶切后连接入pLV-TRE质粒,构建pLV-TRE-302慢病毒重组体,酶切及测序予以鉴定.将重组质粒和辅助质粒共同转染293 FT细胞,并测定病毒滴度.用病毒转染HeLa细胞,强力霉素(doxycline,DOX)诱导后,通过real-time PCR测定miR-302/367家族基因及其下游调节基因的表达.实验分为诱导组(DOX+)、非诱导组(DOX-)和空白组(blank).结果:酶切及测序证实重组慢病毒载体pri-mir-302/367构建成功,病毒滴度为5×106 TU/ml;DOX诱导72 h后,real-time PCR结果显示诱导组高于非诱导组和空白组(P＜0.05,其中miR-302a:PDOX+vsmX-=0.032,PDOX+vs.blank=0.048;miR-302b:POX+vs.POX-=0.001,PDOX+vs.blank=0.001;miR-302c:PDOX+vs.DOX-=0.000,PDOX+vs.blank=0.000;miR-302d:PDOX+vs.DOX-=0.002,PDOX+vs.blank=0.047;miR-367:PDOX+vs.DOX-=0.001,PDOX+vs.blank=0.001;OCT4:PDOX+vs.DOX-=0.000,PDOX+vs.blank=O.001;SOX2:PDOX+vs.DOX-=0.000,PoX+vvs.blank=0.000;NANOG:PDOX+vs.DOX-=0.000,PDOX+vs.blank=0.000),而非诱导组与空白组相比差异无统计学意义(P＞0.05,其中miR-302a:Pblankvs.DOX_=0.057;miR-302b:Pblankvs.DOX_=0.832;miR-302c:Pblank vs.DOX-=0.445;miR-302d:Pblank vs.DOX_=0.979;miR-367:Pblank vs.DOX-=0.161;OCT4:Plank vs.DOX-=0.051;SOX2:Plank vs.DOX-=0.060;NANOG:Pblank vs.DOX-=0.078).结论:成功构建了携带人miR-302/367可控性慢病毒载体,为后续的重编程研究奠定了实验基础.
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